In vivo spin trapping van vrije radicalen ten gevolge van LPS-instillatie in de longen van muizen

Abstract

Oxidatieve stress speelt een belangrijke rol in verschillende ziekteprocessen. De gevormde vrije zuurstofradicalen die tijdens dit proces gevormd worden, kunnen reacties aangaan met onder andere proteïnen, DNA en lipiden. Deze vrije zuurstofradicalen kunnen opgespoord worden door middel van electron spin resonantie (ESR) spectroscopie. Maar omdat deze zuurstofradicalen slechts een korte levensduur hebben, wordt gebruik gemaakt van een spin trap, welk in het proefdier gebracht wordt, om zo een radicaal-adduct te vormen dat gedurende een langere periode stabiel en meetbaar is. In dit geval spreekt men van in vivo spin trapping. Het doel van deze studie is om na te gaan of de toegepaste in vivo spin trapping techniek, die gebruik maakt van de spin trap POBN, geschikt is voor het detecteren van vrije zuurstofradicalen geproduceerd in reactie op LPS. Bovendien wordt ook nagegaan welke soorten vrije radicalen geproduceerd worden. Aan de hand van een positieve controle experiment wordt bepaald dat wanneer er vrije zuurstofradicalen geproduceerd worden in reactie op LPS, deze ook door middel van de spin trap POBN een ESR signaal opleveren. Bovendien wordt door dit experiment ook aangetoond dat de gevormde zuurstofradicalen niet het resultaat zijn van ex vivo productie. Dus dit experiment toont aan dat de toegepaste in vivo spin trapping methode werkt. Het invries effect op het ESR signaal wordt ook nagegaan en dit heeft als uitkomst dat er geen effect is. Voor de eigenlijke in vivo spin trapping studie worden 4 muizen gebruikt, waarvan twee een i.t. instillatie met LPS en de twee overige een i.t. instillatie met fysiologische zoutoplossing ondergaan. Vervolgens ondergaan ze een i.p. injectie met de spin trap POBN, waarna ze opgeofferd worden. Verschillende organen worden opgewerkt en het bekomen fosfolipide extract wordt vervolgens gebruikt voor een ESR meting, fosfaatbepaling en malondialdehyde bepaling. Deze experimenten leveren geen POBN-signaal op, zowel niet in de controle muizen als in de LPS-behandelde muizen. Er wordt wel een vitamine C signaal in de lever en milt extracten van alle muizen teruggevonden. Dit signaal is het hoogst voor de LPS-behandelde muizen. De MDA bepaling laat ook zien dat de meeste lipide peroxidatie heeft opgetreden in de milt van de LPS-behandelde muizen.