Assessing actin-cMyBP-C interactions in IPS cell-derived cardiomyocytes

Abstract

Cardiac Myosin Binding Protein C (cMyBP-C) interageert met myosine en actine. Het wordt verondersteld dat cMyBP-C een cruciale rol speelt in de actomyosine cross-bridge cycling. CMyBP-C mutaties leiden tot hypertrofische cardiomyopathie, maar de exacte mechanismes zijn nog steeds niet gekend. Om de interacties met actine in kaart te brengen, werden fusie-eiwit constructen ontworpen die cMyBP-C en actin labellen met respectievelijk GFP en RFP. Met behulp van Förster Resonance Energy Transfer (FRET) kan de afstand tussen de twee labels bepaald worden, wat dan informatie zal geven over de ruimtelijke verhouding tussen de twee eiwitten. Sinds het gebruik van humane cardiomyocyten invasief is voor de donor en niet voldoende cellen oplevert, werd er gebruik gemaakt van een iPS model. IPS cellen werden getransfecteerd met de constructen om vervolgens tot cardiomyocyten te differentiëren, die dan geanalyseerd worden op basis van FRET en functionele assays zoals cell traction force microscopie.