Isolatie van Gc-globuline uit serum

Abstract

Epsilon Biotech te Zonhoven doet onder andere onderzoek naar de productie van GcMAF om te kunnen gebruiken als adjuvans dat het eigen immuunsysteem stimuleert. Om GcMAF te kunnen produceren, moet eerst Gc-globuline uit serum geïsoleerd worden op een zo rendabel mogelijke manier. Tot op heden werd dit nog niet gerealiseerd. Ook werd een kwalitatieve methode ontwikkeld om Gc-globuline aan te tonen.

Om Gc-globuline te isoleren uit het serum werden er twee afzonderlijke zuiveringsstappen ondernomen. Eerst wordt gelfiltratie toegepast waarbij Gc-globuline op basis van zijn molmassa gescheiden wordt van minerale zouten en kleine ongewenste proteïnen, maar ook van grotere proteïnen en proteïnecomplexen. Met behulp van een fosfaatgebufferde zoutoplossing als elutiebuffer wordt het serum gefractioneerd opgevangen. De tweede zuiveringsstap die uitgevoerd werd is affiniteitschromatografie waarbij een kleurstof, Cibacron Blue F3GA, specifiek bindt met verschillende proteïnen afhankelijk van de milieuomstandigheden en elutiebuffers die gebruikt worden. Tussentijdse controles om Gc-globuline aan te tonen worden gedaan met behulp van kwalitatieve dot blots, die volledig opgestart werd en een kwantitatieve sandwich-ELISA.

Het resultaat van het onderzoek toont aan dat Gc-globuline wel degelijk geïsoleerd kan worden met behulp van gelfiltratie en affiniteitschromatografie. Naast de isolatie van Gc-globuline werd ook een kwalitatieve dot blot met succes opgestart om snel en eenvoudig Gc-globuline aan te tonen.