Transformatie van Gc-globuline tot GcMAF

Abstract

Gc-macrofaagactiverend eiwit (GcMAF), een plasmaproteïne gevormd na enzymatische deglycosylatie van Gc-globuline, beschikt over macrofaagactiverende eigenschappen waardoor het mogelijk toegediend kan worden als adjuvans voor het natuurlijk afweersysteem. Het doel van deze masterproef is onderzoeken of membraangebonden '-galactosidase en neuraminidase op humane lymfocyten inzetbaar zijn voor de in vitro transformatie van serum Gc-globuline tot GcMAF.

Leukocyten worden afgezonderd van vers citraatvolbloed, geactiveerd en gedurende variërende tijd geïncubeerd met humaan serum bij 37°C. De '-galactosidase- en neuraminidase-enzymactiviteit van celvrij serum en geïsoleerde leukocyten wordt bepaald door de emissiemeting van het fluorescerend product 4-methylumbelliferone dat vrijkomt door de enzymatische hydrolyse van het substraat 4-methylumbelliferyl-'-D-galactopyranoside en 2-(4-methylumbelliferyl)-'-D-N-acetylneuraminezuur door respectievelijk '-galactosidase en neuraminidase.

Een traag stijgende enzymexpressie van membraangebonden '-galactosidase op geactiveerde leukocyten wordt waargenomen na incubatie in 100% serum met slechts een geringe enzymactiviteitstijging van vrije enzymen in het serum. Optimalisatie van de methode voor het bepalen van de verandering in membraangebonden neuraminidase-enzymactiviteit na variërende incubatieperioden in serum is nog vereist voor het treffen van een conclusie over het gebruik van humane lymfocyten voor de in vitro transformatie van serum Gc-globuline tot GcMAF.