Opzuivering van Gc-globiline uit serum/plasma via Cohn fractionatie & affiniteitschromatografie

Abstract

Epsilon Biotech is een biotechnologisch bedrijf in Zonhoven dat momenteel onderzoek doet naar het opzuiveren van Gc-globuline uit humaan plasma voor therapeutische toepassingen. Epsilon Biotech merkte op dat Gc-globuline zich in fractie 4-1 van de Cohn-fractionering bevindt die tot op heden niet wordt gebruikt. In dit onderzoek werd een methode opgesteld om de Cohn-fractionering te reconstrueren. Daarnaast werd een procedure opgesteld om Gc-globuline op te zuiveren uit de Cohn-fracties.

De opzuivering van Gc-globuline werd gehinderd door de aanwezigheid van andere serumproteïnen zoals fibrinogeen en albumine. Door gebruik te maken van gelfiltratie met een Sephadex-kolom kon de scheiding tussen Gc-globuline en albumine niet verwezenlijkt worden. Dit onderzoek beoogde het efficiënt opzuiveren van Gc-globuline uit storende serumproteïnen. Via de Cohn-fractionering werden de serumeiwitten opgedeeld in verschillende fracties. De concentratie Gc-globuline werd bepaald in de verschillende fracties. Affiniteitschromatografie werd uitgevoerd op de fractie met de hoogste concentratie Gc-globuline. Na de affiniteitschromatografie werden de concentraties aan Gc-globuline, eiwit en albumine in de bekomen fracties bepaald met respectievelijk ELISA, spectrofotometrie en antiserum turbidimetrie.

Er werd een zuiverheid behaald van 7,96mg/g in serum en 8,85mg/g in plasma via de Cohn-fractionering. Na affiniteitschromatografie werd er een zuiverheid van 17,3mg/g bekomen. De zuiverheid is zodoende met factor 4,4 gestegen.