Characterization of in vitro salivary gland models to investigate the radioprotective effect of amifostine after prostate cancer radiation therapy

Abstract

Speekselkliertoxiciteit is een belangrijk neveneffect tijdens [177Lu]Lu-PSMA-617 therapie. Een 3D cultuur wordt verwacht relevanter te zijn voor het bestuderen van functionele schade. Amifostine zou de speekselklieren kunnen beschermen tijdens behandeling. Amifostine moet geconverteerd worden naar zijn actieve metaboliet door alkaline fosfatase, wat tot expressie komt in gezonde cellen en gedownreguleerd wordt in kanker cellen. A-253 3D cel cultuur werd geoptimaliseerd met verschillende concentraties Matrigel®. Optimalisatie van NKCC1 en AQP-5 proteïne detectie door western blot werd uitgevoerd met verschillende blokkeerbuffers en verschillende concentraties van het primair antilichaam op A-549 en HK-2 cellen. De activiteit van alkaline fosfatase werd gemeten in PC3-Flu, PC3-PIP en A-253 cellen met de Alkaline fosfatase Diethanolamine Activity Kit. Cytotoxiciteit van amifostine werd onderzocht met de sulforhodamine B assay. Het effect van amifostine na blootstelling aan 0, 2 of 5 Gray (X-straling) werd onderzocht met de MTS assay. Een succesvol 3D cultuur werd gevormd. Niet-specifieke antilichaam binding werd gedetecteerd voor het AQP-5 antilichaam, terwijl een specifiek bandje werd gedetecteerd van NKCC1 in A-549 cellen, dat afwezig was in HK-2 cellen. A-253 cellen toonde een hogere alkaline fosfatase activiteit dan PC3-Flu en PC3-PIP cellen. De hoogste concentraties van amifostine toonde cytotoxische effecten, terwijl de effecten tijdens EBRT niet eenduidig waren.