Site-specific fluorescent labeling of human DNA ligases for single-molecule investigation of protein dynamics and substrate binding modes

Abstract

DNA-ligasen spelen een cruciale rol bij het herstellen van DNA-breuken en worden geassocieerd met kanker en immuundeficiëntiesyndromen. Het begrijpen van hun structuur-functie relatie is belangrijk voor de ontwikkeling van effectieve behandelingen. Eerdere studies hebben de complexe structuur van het enzym onthuld, maar informatie over de eiwitdynamica ontbrak. In dit onderzoek is gebruik gemaakt van enkele-molecuul FRET om intramoleculaire eiwitdynamica te bestuderen. Het enzym werd fluorescent gelabeld en getest op functionele integriteit door ligatie-assays en fluorescentiecorrelatiespectroscopie. Hoewel er verdere optimalisatie nodig is, biedt dit onderzoek een basis voor toekomstige smFRET-studies naar DNA-ligasen en draagt het bij aan ons begrip van hun structuur, functie en therapeutisch potentieel.