Biotechnological Production of Nanobodies Against Epithelial Ovarian Cancer

Abstract

Epitheliale eierstokkanker is de vierde meest voorkomende doodsoorzaak bij vrouwen met kanker ter wereld. Om de bijwerkingen van chemotherapie te verminderen en de overlevingskansen te verhogen, dient de kanker in een vroeg stadium opgespoord te worden. HE4, PGRN en SLPI zijn veelbelovende biomerkers voor de detectie van epitheliale eierstokkanker. Nanobodies, afkomstig van kameelachtigen, zijn een ideale tool om de eerder genoemde biomerkers op te sporen met behulp van biosensoren. Dit dankzij hun kleine afmetingen, hoge stabiliteit en makkelijke genetische manipulatie.

Het doel van deze thesis is om de biotechnologische productie van nanobodies in Escherichia coli te optimaliseren. De expressie kan worden gecombineerd met intein-mediated protein ligation om een alkyn-gemodificeerde nanobody te krijgen dat gebruikt kan worden voor de immobilisatie in biosensoren. De expressie werd geoptimaliseerd aan de hand van verschillende expressieparameters (temperatuur, tijd, medium, concentratie expressie-inducer). De opzuivering van nanobodies gebeurde vervolgens via affiniteitschromatografie op basis van een chitine kolom.

De SDS-PAGE resultaten van de expressie geven weer dat de hoogste expressie wordt waargenomen bij 37°C, in LB of TB medium, gedurende 2 tot 3 uren en met een concentratie van 0,1 mM inducer. De resultaten van de opzuivering tonen aan dat verder onderzoek noodzakelijk is.

Dankzij de bekomen resultaten staat men een stap dichter bij de beoogde nanobody sensoren.